紐倫堡法典 

第二次世界大戰(zhàn)以后，在德國(guó)紐倫堡組織了國(guó)際軍事法庭審判納粹戰(zhàn)犯，《紐倫堡法典》是1946年審判納粹戰(zhàn)爭(zhēng)罪犯的紐倫堡軍事法庭決議的一部分，它牽涉到人體實(shí)驗(yàn)的十點(diǎn)聲明，其基本原則有二，一是必須有利于社會(huì)，二是應(yīng)該符合倫理道德和法律觀點(diǎn)，因而又稱為《組倫堡十項(xiàng)道德準(zhǔn)則》。

此文件的精神 在某種程度上被1964年第十三屆世界醫(yī)學(xué)會(huì)通過(guò)的《赫爾辛基宣言》所接受，成為人體實(shí)驗(yàn)的指導(dǎo)方針?！都~倫堡法典》的全文如下： 

   1、受試者的自愿同意絕對(duì)必要

    這意味著接受試驗(yàn)的人有同意的合法權(quán)力；

    應(yīng)處于有選擇自由的地位，不受任何勢(shì)力的干涉、欺瞞、蒙蔽、挾持，哄騙或者其他某種隱蔽形式的壓制或強(qiáng)迫；

    對(duì)于實(shí)驗(yàn)的項(xiàng)目有充分的知識(shí)和理解，足以作出肯定決定之前，必須讓他知道實(shí)驗(yàn)的性質(zhì)、期限和目的;實(shí)驗(yàn)方法及采取的手段；

    可以預(yù)料得到的不便和危險(xiǎn)，對(duì)其健康或可能參與實(shí)驗(yàn)的人的影響。

確保同意的質(zhì)量的義務(wù)和責(zé)任，落在每個(gè)發(fā)起、指導(dǎo)和從事這個(gè)實(shí)驗(yàn)的個(gè)人身上。這只是一種個(gè)人的義務(wù)和責(zé)任，并不是代表別人，自己卻可以逍遙法外。 

    2、實(shí)驗(yàn)應(yīng)該收到對(duì)社會(huì)有利的富有成效的結(jié)果，用其他研究方法或手段是無(wú)法達(dá)到的，在性質(zhì)上不是輕率和不必要的。 

    3、實(shí)驗(yàn)應(yīng)該立足于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)取得結(jié)果，對(duì)疾病的自然歷史和別的問(wèn)題有所了解的基礎(chǔ)上，經(jīng)過(guò)研究，參加實(shí)驗(yàn)的結(jié)果將證實(shí)原來(lái)的實(shí)驗(yàn)是正確的。 

    4、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行必須力求避免在肉體上和精神上的痛苦和創(chuàng)傷。

    5、事先就有理由相信會(huì)發(fā)生死亡或殘廢的實(shí)驗(yàn)一律不得進(jìn)行，除了實(shí)驗(yàn)的醫(yī)生自己也成為受試者的實(shí)驗(yàn)不在此限。

    6、實(shí)驗(yàn)的危險(xiǎn)性，不能超過(guò)實(shí)驗(yàn)所解決問(wèn)題的人道主義的重要性。

    7、必須作好充分準(zhǔn)備和有足夠能力保護(hù)受拭者排除那怕是微之又微的創(chuàng)傷、殘廢和死亡的可能性。

    8、實(shí)驗(yàn)只能由科學(xué)上合格的人進(jìn)行。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的人員，在實(shí)驗(yàn)的每一階段都需要有極高的技術(shù)和管理。

    9、當(dāng)受試者在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，已經(jīng)到達(dá)這樣的肉體與精神狀態(tài)，即繼續(xù)進(jìn)行已經(jīng)不可能的時(shí)候，完全有停止實(shí)驗(yàn)的自由。

    10、在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，主持實(shí)驗(yàn)的科學(xué)工作者，如果他有充分理由相信即使操作是誠(chéng)心誠(chéng)意的，技術(shù)也是高超的，判斷是審慎的，但是實(shí)驗(yàn)繼續(xù)進(jìn)行，受試者照樣還要出現(xiàn)創(chuàng)傷、殘廢和死亡的時(shí)候，必須隨時(shí)中斷實(shí)驗(yàn)。

 信息來(lái)源：

（何兆雄譯自Rerch, W.T. (ed.).Encyclopedia of Bioethics.New York；

The Free Press.1978.1764-65

轉(zhuǎn)自張鴻鑄何兆雄遲連莊主編,中外醫(yī)德規(guī)范通覽.天津：

天津古籍出版社.2000；第1048-1049頁(yè)）

    農(nóng)業(yè)部2008年12月24日召開農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理部際聯(lián)席會(huì)議，會(huì)議同意發(fā)放兩個(gè)轉(zhuǎn)基因水稻和一個(gè)轉(zhuǎn)基因玉米的安全證書。此關(guān)系到13億人口主糧的重要信息，農(nóng)業(yè)部隱瞞了一年未有絲毫公開，直到2019年12月初才公布。

信息來(lái)源：農(nóng)業(yè)部隱匿轉(zhuǎn)基因稻米信息長(zhǎng)達(dá)一年；綠色和平要求立即停止其商業(yè)化進(jìn)程

http://www.greenpeace.org/china/zh/news/releases/food-agriculture/2010/03/moa-response-pr/

    2010年3月10日，農(nóng)業(yè)部副部長(zhǎng)危朝安就轉(zhuǎn)基因問(wèn)題再次強(qiáng)調(diào)，危朝安說(shuō)，發(fā)放安全證書是對(duì)科學(xué)家轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)研究工作及其成果的評(píng)價(jià)與肯定，并不等同于允許商業(yè)化生產(chǎn)。按照相關(guān)法律法規(guī)，還要進(jìn)行比普通作物品種審定更加嚴(yán)格的區(qū)域試驗(yàn)和生產(chǎn)試驗(yàn)，以及嚴(yán)格的生產(chǎn)許可證和經(jīng)營(yíng)許可證審核，方可進(jìn)行商業(yè)化生產(chǎn)。

信息來(lái)源：農(nóng)業(yè)部：從未批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因糧食種子商業(yè)化種植

http://www.ce.cn/cysc/agriculture/gdxw/201003/11/t20100311_20239923.shtml

    2013年9月7日上午，在中國(guó)工程院院士、國(guó)家玉米改良工程中心主任戴景瑞等專家?guī)ьI(lǐng)下，20多名主動(dòng)報(bào)名的網(wǎng)友來(lái)到中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)玉米試驗(yàn)基地現(xiàn)場(chǎng)采摘轉(zhuǎn)基因玉米，并煮熟品嘗。

    現(xiàn)場(chǎng)還有兩個(gè)孩子的身影。中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院院長(zhǎng)羅云波帶著妻兒一同前來(lái)，37歲的電子工程師林敏華也帶著6歲的兒子前來(lái)試吃，他在微博上看到活動(dòng)消息后就主動(dòng)報(bào)了名。

林敏華表示，自己作為一名技術(shù)工作者，應(yīng)該為轉(zhuǎn)基因“正名”，帶兒子一起來(lái)是為了讓身邊認(rèn)為吃轉(zhuǎn)基因食品“斷子絕孫”的人們看到，用實(shí)際行動(dòng)來(lái)證明這是謠言。

專家介紹，這個(gè)品種的轉(zhuǎn)基因玉米主要作為飼料，既非甜玉米也非黏玉米，但當(dāng)煮熟的玉米出爐后，現(xiàn)場(chǎng)不少網(wǎng)友紛紛贊嘆“很香”、“好吃”。

    活動(dòng)發(fā)起人方舟子則表示，無(wú)論是品嘗轉(zhuǎn)基因大米還是玉米，科學(xué)上沒(méi)有意義，因?yàn)槠浒踩栽缫驯蛔C實(shí)，“美國(guó)人從1990年開始吃到現(xiàn)在，根本不需要再找一批志愿者嘗嘗這個(gè)東西安不安全。”他指出，試吃不是一個(gè)嚴(yán)格的科學(xué)實(shí)驗(yàn)，確實(shí)是一個(gè)“作秀”。

信息來(lái)源：方舟子召集網(wǎng)友試吃轉(zhuǎn)基因玉米 稱應(yīng)讓國(guó)人天天吃

http://news.xinmin.cn/shehui/2013/09/08/21822260_2.html

    2010年2月22日，在回答國(guó)家發(fā)改委領(lǐng)導(dǎo)的提問(wèn)時(shí)，張啟發(fā)的結(jié)論是：食用轉(zhuǎn)基因大米帶來(lái)的危險(xiǎn)，不會(huì)比喝水的危險(xiǎn)更大。

信息來(lái)源：國(guó)家發(fā)改委領(lǐng)導(dǎo)詢問(wèn)轉(zhuǎn)基因大米安全性，張啟發(fā)答：危險(xiǎn)不會(huì)比喝水更大

http://news.sohu.com/20100223/n270369069.shtml

    2010年4月19日，張啟發(fā)首次向公眾透露這份來(lái)自第三方的評(píng)價(jià)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果。這項(xiàng)轉(zhuǎn)基因水稻的評(píng)價(jià)試驗(yàn)，分別由（陳君石院士、徐海濱研究員、楊曉光研究員領(lǐng)銜）中國(guó)疾病預(yù)防控制中心營(yíng)養(yǎng)與食品安全所和農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（北京）完成。其中的小鼠灌胃試驗(yàn)顯示，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)生的抗蟲蛋白以5g/kg的量灌胃小鼠，觀察7天后，無(wú)動(dòng)物死亡或中毒情況出現(xiàn)，根據(jù)毒性分級(jí)，該蛋白屬實(shí)際無(wú)毒。

   中國(guó)疾病預(yù)防控制中心食品安全研究所研究員楊曉光和中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院教授黃昆侖對(duì)評(píng)價(jià)試驗(yàn)的結(jié)論是：證明了轉(zhuǎn)基因水稻“華恢1號(hào)”和“Bt汕優(yōu)63”與非轉(zhuǎn)基因水稻同樣安全，消費(fèi)者可以放心食用。

信息來(lái)源：《南方都市報(bào)》2010-4-20《華中農(nóng)大院士張啟發(fā)：轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻食用安全》

http://www.dnong.com/info/keji/2010/321810.shtml

    中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院院長(zhǎng)羅云波與黃昆侖教授領(lǐng)銜的“食用安全性”毒理學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)：

    對(duì)老鼠用Cry1C蛋白一次性灌胃，觀察“前后其腸道菌群的變化,進(jìn)而對(duì)該抗蟲蛋白的食用安全性進(jìn)行較為深入的研究。DGGE圖譜經(jīng)UPGAMA聚類分析顯示：小鼠間菌群結(jié)構(gòu)存在較明顯的個(gè)體差異;實(shí)驗(yàn)期間,對(duì)照組小鼠灌胃前后其菌群基本保持穩(wěn)定;實(shí)驗(yàn)組小鼠試驗(yàn)前后腸道菌群變化差異較對(duì)照組明顯。隨著灌胃的停止其變化差異在經(jīng)歷過(guò)高峰后會(huì)隨著停喂時(shí)間的延長(zhǎng)而減小,且菌相有逐漸恢復(fù)灌胃前結(jié)構(gòu)的趨勢(shì)。從腸道菌相的角度分析可知：該抗蟲Cry1C蛋白對(duì)小鼠是基本安全的。”

    羅云波院長(zhǎng)、黃昆侖教授喂養(yǎng)老鼠試驗(yàn)用的樣品既不是人類食用的“轉(zhuǎn)基因Bt大米”，所使用的Cry1C 蛋白更不是轉(zhuǎn)基因Bt稻米中獲得的轉(zhuǎn)基因Cry1C蛋白，而是與轉(zhuǎn)基因Bt稻米毫無(wú)關(guān)系來(lái)自細(xì)菌培育的Cry1C蛋白，是徹頭徹尾“假樣品”。

    羅云波院長(zhǎng)、黃昆侖教授的論文卻強(qiáng)詞奪理辯解：

    “本試驗(yàn)所用 Cry1C 蛋白由本實(shí)驗(yàn)室表達(dá)純化而得，其純度為 96.8%，并已驗(yàn)證其與轉(zhuǎn)Bt基因水稻的Cry1C 蛋白具有實(shí)質(zhì)等同性。”

信息來(lái)源：羅云波、黃昆侖et al., 口服急性毒性試驗(yàn)中Cry1C蛋白對(duì)鼠腸道菌群的影響,

農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2010(2)，pp346-351

http://www.cqvip.com/qk/97947X/201002/33864913.html

    眾所周知，大米是中國(guó)數(shù)億民眾“一日三餐的主食”，不是偶爾吃，而是每月多數(shù)天經(jīng)常吃的主糧。羅云波院長(zhǎng)、黃昆侖教授所做的“食用安全性”毒理學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)揭示“實(shí)驗(yàn)組小鼠試驗(yàn)前后腸道菌群變化差異較對(duì)照組明顯”，如果不是一次性灌胃，而是終生持續(xù)每天灌胃，而且連續(xù)三代做試驗(yàn)，“腸道菌群變化差異較對(duì)照組明顯”必將發(fā)展為一系列的健康危害！

    依據(jù)老鼠一次性食用純Bt蛋白觀察七天的“動(dòng)物試驗(yàn)”是“假試驗(yàn)”、“偽試驗(yàn)”，是誤導(dǎo)，是欺騙，是作偽證！依據(jù)這樣的“動(dòng)物試驗(yàn)”所頒發(fā)的“轉(zhuǎn)基因作物安全許可證”也是是誤導(dǎo)、欺騙、作偽證的“許可證”，應(yīng)予以撤銷。

信息來(lái)源： 張啟發(fā)依老鼠偽試驗(yàn)獲轉(zhuǎn)基因稻米安全許可證應(yīng)撤銷

http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0100refn.html

作者：Jiao Z, Si XX, Li GK, Zhang ZM, Xu XP.

Source: School of Chemistry and Chemical Engineering, Sun Yat-Sen University, Guangzhou, Guangdong 510275, China.

作者單位：中國(guó)，廣東，中山大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院

摘要（中譯文）

      用近紅外反射法（GC-MS）、氣相色譜-質(zhì)譜法（HPLC）、高效液相色譜法（ICP-AES）電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法（near-infrared reflectance），并以化學(xué)計(jì)量法研究轉(zhuǎn)基因稻米籽粒發(fā)生的非預(yù)期成分改變。對(duì)可抗霉菌病和抗蟲轉(zhuǎn)基因水稻的三種轉(zhuǎn)基因稻米進(jìn)行了各自與其對(duì)應(yīng)非轉(zhuǎn)基因稻米的重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)成分的對(duì)比性研究，研究的重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)成分為經(jīng)濟(jì)合作發(fā)展組織（OECD）推薦的蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪酸、維生素、（微量）元素與抗?fàn)I養(yǎng)植酸（antinutrient phytic acid）。通過(guò)化學(xué)計(jì)量學(xué)方法對(duì)成分剖面圖進(jìn)行區(qū)分，被區(qū)分的成分為蛋白質(zhì)、三種氨基酸、兩種脂肪酸、兩種維生素及其他數(shù)種（微量）元素。通過(guò)分析差異分析證明這些成分存在顯著區(qū)別，變化幅度為：氨基酸20-74%，脂肪酸19-38%，維生素25-57%，（微量）元素20-50%，蛋白質(zhì)25%；植酸沒(méi)有顯著變化。轉(zhuǎn)基因稻米與對(duì)應(yīng)非轉(zhuǎn)基因稻米比較的非預(yù)期成分性改變與非預(yù)期的物理特征改變，可能與基因的轉(zhuǎn)入有關(guān)，需要通過(guò)更多的研究解釋這些變化的作用。

核心提示：湖南師大的一篇碩士研究論文披露：用張啟發(fā)的Bt汕優(yōu)63轉(zhuǎn)基因水稻進(jìn)行小鼠喂養(yǎng)試驗(yàn)，僅僅進(jìn)行了90天的實(shí)驗(yàn)，小鼠的腸腺細(xì)胞就出現(xiàn)了病變?cè)錾?！湖南師大碩士把實(shí)驗(yàn)結(jié)論定性為“基本上是安全的”恐怕是不得已而為之，因?yàn)樵谀壳按罅ν菩修D(zhuǎn)基因主糧政治氛圍下，如把結(jié)論定性為不安全的話怕是連碩士學(xué)位都拿不到,否則按照實(shí)驗(yàn)的真實(shí)情況，既然出現(xiàn)了小鼠病變，本應(yīng)該定性為“不安全”才對(duì)。另外，這篇論文還指出了Bt63轉(zhuǎn)基因水稻還具有潛在的過(guò)敏源。

摘要：

    本論文通過(guò)五個(gè)試驗(yàn)研究轉(zhuǎn)Bt(Bacillus thuringiensis)基因稻谷中所表達(dá)的cry1Ac殺蟲蛋白對(duì)小鼠的體內(nèi)血清生化指標(biāo)、胚胎生長(zhǎng)發(fā)育、臟器指數(shù)、小鼠小腸mtDNA突變的影響；以及外源基因和外源蛋白質(zhì)在小鼠體內(nèi)殘留程度與轉(zhuǎn)基因稻谷的潛在致敏性，旨在為評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)Bt基因稻谷的食用安全性提供科學(xué)依據(jù)，并獲得了如下主要結(jié)果：

試驗(yàn)1：轉(zhuǎn)Bt基因稻谷對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)和器官發(fā)育的影響

    試驗(yàn)將80只6周的小鼠隨機(jī)分成兩個(gè)處理組，每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只小鼠(5只公鼠，5只母鼠)，對(duì)照組飼喂同一品種的非轉(zhuǎn)基因稻谷日糧(C組)，試驗(yàn)組飼喂轉(zhuǎn)基因稻谷日糧(Bt組)。試驗(yàn)期90d（天），90d時(shí)每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取5只小鼠，眼球靜脈取血，測(cè)定血常規(guī)血生化指標(biāo)；取血后處死，測(cè)定重要器官指數(shù)；其中小腸、肝臟、肺臟和脾臟做成顯微切片觀察病理變化，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組血常規(guī)血生化指標(biāo)正常，重要器官指數(shù)未見顯著差異，肝臟、肺臟和脾臟切片未見明顯病理變化，但小腸切片表明實(shí)驗(yàn)組小鼠小腸腺細(xì)胞產(chǎn)生了病變性增生。

試驗(yàn)2：轉(zhuǎn)Bt基因稻谷對(duì)小鼠胚胎生長(zhǎng)發(fā)育的影響

    將試驗(yàn)一的雄雌大鼠按1∶1合籠，每天對(duì)雌鼠進(jìn)行陰道涂片檢查，以發(fā)現(xiàn)精子之日為妊娠0d，于妊娠20d處死孕鼠進(jìn)行剖檢。然后對(duì)妊娠小鼠體重增加觀察各組于妊娠的0、4、8、12、16、20 d稱重，觀察體重的變化。對(duì)妊娠小鼠生殖能力檢查觀察并記錄胚胎稱重、著床數(shù)、活胎數(shù)、死胎數(shù)、吸收胎數(shù)?；钐ブ鹨粰z查記錄性別、體重、身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)及外觀有無(wú)畸形。將每窩1/2胎仔用茜素紅染色，檢查骨骼項(xiàng)目。將每窩1/2胎仔用Bouin氏液固定2周，用徒手切片法作內(nèi)臟檢查。結(jié)果表明轉(zhuǎn)Bt基因稻谷對(duì)孕鼠孕期體重增長(zhǎng)沒(méi)有影響，活胎仔肉眼外觀檢查結(jié)果表明，頭部、四肢、尾、軀干、面部、腭、唇均無(wú)畸形。用放大鏡按順序檢查各臟器大小、形狀及位置，Bt組和對(duì)照組均未見異常。

試驗(yàn)3：轉(zhuǎn)Bt基因稻谷的致敏性生物信息學(xué)預(yù)測(cè)

    用三維結(jié)構(gòu)比較工具比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，Bt毒素蛋白和多種常見的細(xì)菌毒素如大腸桿菌素A(ColicinA)、白喉毒素(Diphtheria)具共同的三維構(gòu)象特征，都含有由多個(gè)疏水的和親水親脂α-螺旋組成的α-螺旋束，其長(zhǎng)度足以跨過(guò)雙層脂膜，具有相似的穿孔機(jī)制。據(jù)此預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)Bt基因稻谷具有致敏性可能，具體情況有待于進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

試驗(yàn)4：取食轉(zhuǎn)Bt基因稻谷的小鼠小腸mtDNA突變的研究

    選定mtDNA的mtDNA12S RNA和16S RNA全序列片段引物，共設(shè)計(jì)4對(duì)引物，擴(kuò)增4個(gè)mtDNA序列PCR產(chǎn)物條帶，將DNA測(cè)序結(jié)果與線粒體基因庫(kù)中的小鼠mtDNA序列對(duì)比，得到所有食用轉(zhuǎn)Bt基因稻谷小鼠小腸標(biāo)本中一致性的2個(gè)有意義的點(diǎn)突變，造成了原來(lái)位置上氨基酸的改變，分別為337G＞C(His→Asp)和1771G＞T(Asn→Lys)。對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果中2個(gè)一致性突變，推測(cè)它們可能起到協(xié)同作用，突變的積累使得線粒體功能出現(xiàn)異常，從而導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)小腸腺細(xì)胞病變性增生。

試驗(yàn)5：轉(zhuǎn)基因稻谷中外源基因和外源蛋白質(zhì)在小鼠體內(nèi)殘留的檢測(cè)

    隨著轉(zhuǎn)基因植物在飼料中的應(yīng)用，人們對(duì)轉(zhuǎn)基因植物中重組DNA及其表達(dá)的目的蛋白質(zhì)是否會(huì)轉(zhuǎn)移到動(dòng)物產(chǎn)品中越來(lái)越關(guān)注。本試驗(yàn)以轉(zhuǎn)Bt基因的抗蟲水稻的稻谷配成日糧飼喂小鼠，90 d時(shí)隨機(jī)抽取5只，無(wú)菌條件下心臟取血，以肝素鈉抗凝；處死，無(wú)菌條件下取小鼠的肝臟、腎臟、脾臟、小腸、腿肌。采用一對(duì)cry1Ac基因特異的引物，以轉(zhuǎn)基因稻谷中的cry1Ac基因的229 bp片段為PCR擴(kuò)增體系和擴(kuò)增條件的陽(yáng)性對(duì)照，以小鼠內(nèi)源GAPDH基因340 bp片段為DNA提取效果陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)血液、肝臟、腎臟、脾臟、小腸、腿肌的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)是否有cry1Ac基因229 bp片段殘留或轉(zhuǎn)移，結(jié)果未擴(kuò)增出該基因的特異性片段。以轉(zhuǎn)基因稻谷配制的小鼠日糧為陽(yáng)性對(duì)照，采用ELISA法檢測(cè)小鼠糞便、肝臟、腎臟、脾臟、小腸、和腿肌是否有由cry1Ac基因表達(dá)的抗蟲蛋白的殘留，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因稻谷日糧中的外源基因所表達(dá)的抗蟲蛋白cry1Ac在體內(nèi)被降解，其小分子片段隨糞便排出體外，最終并未在小鼠的內(nèi)臟器官和肌肉中累積。

    綜上所述，通過(guò)本文系列研究發(fā)現(xiàn)以轉(zhuǎn)Bt基因稻谷作為小鼠飼料，在實(shí)驗(yàn)期間，被飼喂90d的小鼠不僅未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生外觀不安全和不健康的性狀，而且對(duì)小鼠親代和子代的血清生化指標(biāo)及其器官的發(fā)育均無(wú)明顯影響；也未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因成分在小鼠體內(nèi)會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移和殘留，由此可見，以轉(zhuǎn)Bt基因稻谷作為小鼠的飼料基本上是安全的。然而小鼠小腸產(chǎn)生了腸腺細(xì)胞病變性增生現(xiàn)象，且mtDNA檢測(cè)出2個(gè)有意義的突變點(diǎn)，上述結(jié)果是否由Bt毒蛋白所致有待進(jìn)一步研究。本研究不但為轉(zhuǎn)基因植物的安全性評(píng)價(jià)提供了重要的科學(xué)數(shù)據(jù)，而且也為轉(zhuǎn)基因稻谷作為人類食物的安全性評(píng)價(jià)提供有意義的借鑒。

    導(dǎo)師：顏亨梅，男，漢族，1950年6月生，湖南安仁人，中共黨員。1985年湖南師大動(dòng)物學(xué)專業(yè)碩士研究生畢業(yè)獲理學(xué)碩士并留校工作。1986年晉升講師，1992年晉升副教授，1995年破格晉升教授。現(xiàn)為湖南師范大學(xué)教授、博士生導(dǎo)師、動(dòng)物學(xué)系系主任；受聘湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)兼職教授、生態(tài)學(xué)博士生導(dǎo)師、中國(guó)地質(zhì)大學(xué)博士生副導(dǎo)師；兼任全國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)理事與教學(xué)工作指導(dǎo)委員、中國(guó)蛛形學(xué)會(huì)常務(wù)理事、中國(guó)生物防治專業(yè)委員會(huì)委員、湖南省動(dòng)物學(xué)會(huì)理事長(zhǎng)、湖南省生態(tài)學(xué)會(huì)副理事長(zhǎng)、湖南省昆蟲學(xué)會(huì)副理事長(zhǎng)、湖南省植物保護(hù)學(xué)會(huì)副理事長(zhǎng)、湖南省醫(yī)衛(wèi)害蟲防治協(xié)會(huì)常務(wù)理事、《生命科學(xué)研究》雜志編委、湖南省中學(xué)生生物學(xué)奧賽競(jìng)賽委員會(huì)副主任、湖南省青少年科普輔導(dǎo)團(tuán)成員。享受國(guó)務(wù)院特殊津貼專家。在國(guó)內(nèi)外發(fā)表論文120篇，合著6部、教材4冊(cè)。

【摘要】：水稻(Oryza sativa L.)是我國(guó)最重要的糧食作物之一,世界上近一半以上的人口都以大米為主食,因此大米的品質(zhì)也越來(lái)越受到人們的關(guān)注。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)對(duì)傳統(tǒng)水稻品種進(jìn)行改良,可以提高大米的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值或拓展其功能。但是,由于對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻的安全性一直存在爭(zhēng)議,因此,有必要對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻的食用安全性進(jìn)行深入系統(tǒng)的研究,為轉(zhuǎn)基因水稻的發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。

    本論文以轉(zhuǎn)GL融合蛋白基因和轉(zhuǎn)雙反義分支酶基因大米為研究對(duì)象,通過(guò)系統(tǒng)的毒理學(xué)試驗(yàn)研究與分析兩種轉(zhuǎn)基因大米的食用安全性,為轉(zhuǎn)基因大米食用安全性評(píng)價(jià)技術(shù)體系的構(gòu)建提供參考。主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下：

    1.對(duì)轉(zhuǎn)雙反義分支酶基因大米進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)研究。將轉(zhuǎn)基因大米以2.15、4.64、10.00和21.50 g/kg·bw的劑量灌胃小鼠,連續(xù)觀察14天。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因大米的LD5021.50 g/kg·bw;試驗(yàn)期間,動(dòng)物狀態(tài)良好,無(wú)死亡和異?，F(xiàn)象；對(duì)各組小鼠體重、血常規(guī)、臟器系數(shù)和主要臟器病理學(xué)觀察也未見顯著性差異。因此,轉(zhuǎn)雙反義分支酶基因大米屬無(wú)毒級(jí)別。

    2.對(duì)轉(zhuǎn)雙反義分支酶基因大米進(jìn)行了遺傳毒性試驗(yàn)研究。對(duì)轉(zhuǎn)基因大米進(jìn)行小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、精子畸形試驗(yàn)、Ames試驗(yàn)和彷徨試驗(yàn)研究。結(jié)果表明,以上試驗(yàn)均呈陰性,未見轉(zhuǎn)雙反義分支酶基因大米產(chǎn)生遺傳毒性。

    3.對(duì)轉(zhuǎn)雙反義分支酶基因大米進(jìn)行了致畸毒性試驗(yàn)研究。用含有轉(zhuǎn)基因大米的飼料喂養(yǎng)大鼠,觀察和分析轉(zhuǎn)基因大米對(duì)孕鼠生長(zhǎng)及胎鼠發(fā)育的影響。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因大米對(duì)孕鼠體重增長(zhǎng)、孕鼠生殖能力、胎鼠發(fā)育(外觀、內(nèi)臟及骨骼)均未產(chǎn)生不良影響,即轉(zhuǎn)雙反義分支酶基因大米未對(duì)試驗(yàn)大鼠產(chǎn)生致畸作用。

    4.對(duì)轉(zhuǎn)雙反義分支酶基因大米進(jìn)行了90天喂養(yǎng)試驗(yàn)研究。用含有轉(zhuǎn)基因大米的飼料喂養(yǎng)大鼠90天,對(duì)大鼠體重、進(jìn)食量、進(jìn)水量、血常規(guī)、血生化、尿常規(guī)、性激素、臟器系數(shù)及組織病理學(xué)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因大米組和親本大米組相比未見顯著性差異；轉(zhuǎn)基因大米組和對(duì)照組相比,小部分生化指標(biāo)存在差異,但不具有生物學(xué)意義,即轉(zhuǎn)雙反義分支酶基因大米未對(duì)試驗(yàn)大鼠產(chǎn)生毒性作用。

    5.對(duì)兩種轉(zhuǎn)基因大米進(jìn)行了三代繁殖試驗(yàn)研究。對(duì)轉(zhuǎn)基因大米進(jìn)行了大鼠三代繁殖試驗(yàn)研究,觀察FO代、F1代和F2代孕鼠繁殖指標(biāo)(交配成功率、受孕率、妊娠時(shí)間和活產(chǎn)率)；F1代、F2代和F3代仔鼠繁殖指標(biāo)(出生成活率、窩平均仔鼠數(shù)、仔鼠雌雄比率、出生窩總重、仔鼠出生體重、身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)、肛殖距)：大鼠生長(zhǎng)發(fā)育及妊娠哺乳期的體重、進(jìn)食量及食物利用率；雌雄成年大鼠血常規(guī)、血生化指標(biāo)；斷乳仔鼠及成年大鼠臟器系數(shù)及病理切片。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因大米組的小部分血液學(xué)指標(biāo)和臟器系數(shù)指標(biāo)存在顯著性差異,這些差異主要集中在轉(zhuǎn)基因大米組和對(duì)照組之間,且這些差異具有隨機(jī)分散性,所以不具有生物學(xué)意義。因此轉(zhuǎn)基因大米未影響母鼠及仔鼠的繁殖能力,未對(duì)大鼠產(chǎn)生毒性作用。

    6.對(duì)兩種轉(zhuǎn)基因大米進(jìn)行了生殖毒性試驗(yàn)研究。給大鼠飼喂轉(zhuǎn)基因大米,觀察與測(cè)定雌性大鼠的動(dòng)情周期、卵巢組織抗氧化能力；觀察與測(cè)定雄性大鼠的精子數(shù)量和畸變率,睪丸細(xì)胞周期變化；測(cè)定雌雄大鼠的性激素水平、肛殖距、生殖器官臟器系數(shù)及病理切片。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因大米組與親本大米組相比,各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)顯著性差異；與對(duì)照組相比,小部分指標(biāo)(睪丸細(xì)胞周期、生殖器官臟器系數(shù))存在差異,但是不具有生物學(xué)意義。因此轉(zhuǎn)基因大米未對(duì)大鼠生殖系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生不利影響。

    7.對(duì)轉(zhuǎn)GL融合蛋白基因大米進(jìn)行了免疫毒性試驗(yàn)研究。對(duì)轉(zhuǎn)基因大米進(jìn)行了balb/c小鼠免疫毒性及免疫原性試驗(yàn)研究,觀察并測(cè)量小鼠血常規(guī)、淋巴細(xì)胞亞群、遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)、刀豆球蛋白(ConA)誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、溶血素水平、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞、免疫器官臟器系數(shù)及外源蛋白檢測(cè)情況。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因大米組、親本大米組及對(duì)照組之間均無(wú)顯著性差異,未在動(dòng)物體內(nèi)及其糞便中檢測(cè)到轉(zhuǎn)基因大米的外源蛋白。因此未見轉(zhuǎn)GL融合蛋白基因大米對(duì)小鼠產(chǎn)生免疫毒性,轉(zhuǎn)基因大米中的外源蛋白能被機(jī)體完全消化分解,不具有免疫原性。

 喂食轉(zhuǎn)基因稻米給老鼠的一該喂食試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因喂食組與喂食非轉(zhuǎn)基因親系品種稻米的對(duì)照組相比，發(fā)現(xiàn)顯著差別。包括喂食轉(zhuǎn)基因組顯著多喝水，以及血液生物化學(xué)、免疫反應(yīng)與腸道菌落的差別。喂食轉(zhuǎn)基因稻米的雌數(shù)器官的重量與喂食非轉(zhuǎn)基因稻米的有差別。對(duì)這些差別進(jìn)行評(píng)論，作者們反而說(shuō)，“所有這些差別沒(méi)有一項(xiàng)被認(rèn)為是有害的”。但是他們還說(shuō)這個(gè)90天的研究“沒(méi)有使我們能夠得出轉(zhuǎn)基因食品安全性的結(jié)論。”

   實(shí)際上，90天的研究太短，無(wú)法顯示所發(fā)現(xiàn)的變化是否“有害”（增加可以識(shí)別疾病的發(fā)病率）。然而，沒(méi)有任何監(jiān)管機(jī)構(gòu)要求對(duì)轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行超過(guò)這種亞慢性（中期）90天喂食期限的試驗(yàn)。

    該項(xiàng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因稻米的成分與其非轉(zhuǎn)基因親系稻米的成分不同，盡管兩種稻米在鄰近農(nóng)田完全相同的條件下生長(zhǎng)。這是表明轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)換過(guò)程擾亂了轉(zhuǎn)基因品種的基因結(jié)構(gòu)和/或功能，使其與非轉(zhuǎn)基因作物實(shí)質(zhì)不等同。

信息來(lái)源：

Poulsen M, Kroghsbo S, Schroder M, et al. A 90-day safety study in Wistar rats fed genetically modified rice expressing snowdrop lectin Galanthus nivalis (GNA). Food Chem Toxicol. Mar 2007; 45(3): 350-363.

22. Poulsen M, Kroghsbo S, Schroder M, et al.喂食表達(dá)雪花血凝素（GNA）轉(zhuǎn)基因稻米Wister老鼠的90天安全性研究。食品化學(xué)毒理學(xué)。2007年3月；45(3): 350-363.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17052828

  該項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)：對(duì)于轉(zhuǎn)基因Bt稻米喂食老鼠的研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因喂食組老鼠與喂食非轉(zhuǎn)基因同基因品種稻米對(duì)照組之間有顯著差別。這些差別包括腸道菌落品種的分布 – 轉(zhuǎn)基因喂食組的大腸型細(xì)菌水平高23%。兩組之間的腎上腺、睪丸與子宮的器官重量也有差別。研究論文的作者結(jié)論，它們的研究“可能的毒理學(xué)發(fā)現(xiàn)”“最有可能來(lái)自轉(zhuǎn)基因稻米的非故意改變，而不是來(lái)自Bt毒素的毒性” 其天然非轉(zhuǎn)基因形式的。

   該項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因稻米的成分與對(duì)應(yīng)非轉(zhuǎn)基因同基因稻米（具有相同遺傳背景但是沒(méi)有轉(zhuǎn)基因）相比在某些礦物質(zhì)水平、氨基酸、總脂肪量與蛋白質(zhì)含量方面有差別。 基于這些差別處于文獻(xiàn)中所有品種稻米的范圍內(nèi)，這些差別不予以考慮。然而，將轉(zhuǎn)基因稻米與遺傳學(xué)截然無(wú)關(guān)的稻米品種進(jìn)行比較在科學(xué)上錯(cuò)誤與不相干。這樣做唯一的作用是掩蓋轉(zhuǎn)基因過(guò)程的影響。 

  盡管這樣的錯(cuò)誤方法，轉(zhuǎn)基因稻米有一種氨基酸，組氨酸，比非轉(zhuǎn)基因同基因品種顯著高，而且超過(guò)任何品種稻米的變化范圍。這是否是個(gè)問(wèn)題？沒(méi)有人知道，因?yàn)樗枰难芯坎](méi)有進(jìn)行。所知道的是，在其他對(duì)于老鼠的研究中，過(guò)量組氨酸造成快速鋅的排泄與嚴(yán)重的鋅缺乏癥。

  此外，脂肪酸、硬植酸（stearic acid）的水平，低于文獻(xiàn)中報(bào)告的任何稻米它們的含量水平。

信息來(lái)源：

Schrøder M, Poulsen M, Wilcks A, et al. A 90-day safety study of genetically modified rice expressing Cry1Ab protein (Bacillus thuringiensis toxin) in Wistar rats. Food Chem Toxicol. Mar 2007; 45(3): 339-349.

Schrøder M, Poulsen M, Wilcks A, et al. .喂食表達(dá)Cry1Ab蛋白（Bt毒素）轉(zhuǎn)基因稻米Wister老鼠的90天安全性研究。食品化學(xué)毒理學(xué)。2007年3月；45(3): 339-349.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17050059

    該項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)：對(duì)喂食轉(zhuǎn)基因Bt稻米的研究發(fā)現(xiàn)非轉(zhuǎn)基因喂食對(duì)照組以及轉(zhuǎn)基因喂食組中都發(fā)生了與Bt毒素特定的免疫反應(yīng)。這種未預(yù)料的發(fā)現(xiàn)引導(dǎo)研究者們結(jié)論，對(duì)照組動(dòng)物中的免疫反應(yīng)必定由于它們吸入了喂食給轉(zhuǎn)基因喂食組的粉狀Bt毒素。研究者們?yōu)榇送扑]，在對(duì)于Bt作物的未來(lái)試驗(yàn)中，轉(zhuǎn)基因喂食的動(dòng)物與對(duì)照組的動(dòng)物應(yīng)當(dāng)放置在不同的房間中或者采用分隔開的喂食輸送系統(tǒng)。

信息來(lái)源：

24. Kroghsbo S, Madsen C, Poulsen M, et al. Immunotoxicological studies of genetically modified rice expressing PHA-E lectin or Bt toxin in Wistar rats. Toxicology. Mar 12 2008; 245(1-2): 24-34.

24. Kroghsbo S, Madsen C, Poulsen M, et al. 表達(dá)PHA-E血凝素或Bt毒素的轉(zhuǎn)基因稻米在Wistar老鼠免疫毒理學(xué)研究。毒理學(xué)。2008年3月12日；245(1-2): 24-34.

http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0300483X07008281