教學片：如何用快速檢測試紙條檢測Bt（Cry1Ab/1Ac）轉基因水稻

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基本常識

§  目前獲得轉基因生物安全證書的兩種轉基因水稻（“華恢1號”和“Bt汕優(yōu)63”）都能夠產(chǎn)生兩種蛋白質Cry1Ac和Cry1Ab，在快速檢測過程中，樣本中只要有兩種中的任何一種蛋白質，試紙條就會顯示陽性。

§  此快速檢測試紙條只能檢測Cry1Ac和Cry1Ab兩種蛋白質，即使樣本是其他的轉基因品種，但是不能產(chǎn)生這兩種蛋白質的話，快速檢測試紙條也沒有作用。

§  所以，此試紙條不能檢測轉基因大豆，需要用專門的檢測試紙條。

檢測步驟

1.     準備樣本

2.     配制蛋白質提取液

3.     提取蛋白質

4.     快速檢測

5.     結果分析

1.準備樣品

§  將可疑的大米、稻種（去殼，約10-20粒）磨碎，盡量達到粉末狀。如果是水稻葉片（約3-4片），需搗碎至泥漿狀。

2.配制蛋白質提取液

§  將檢測用的粉末和純凈水以1：10的比例（體積比）混合，充分搖勻備用（約3分鐘）。

§  容器可以選擇10ml的塑料密封管。

§  配制完成后常溫保存，當日配當日用。

3.提取蛋白質

§  將磨碎的樣本和提取液以1：4的比例（體積比）混合，充分搖勻（約1-2分鐘），混合均勻后靜置備用。

§  容器可以選擇1.5ml的塑料密封管。

4.快速檢測

§  保持垂直方向將檢測試紙條上標有“sample”的一端浸入樣品提取液中。試紙條浸入樣品提取液的部分不要超過0.5cm。在整個檢測過 程中要保持試紙條始終浸在樣品提取液中（3-5分鐘即可）。

5.結果分析

§  質控線一般會在3—5分鐘內出現(xiàn)。最長的反應時間為20分鐘，在這段時間里最好將試紙條從樣品提取液中取出。如果質控線沒有出現(xiàn)，那么本次檢測失敗。

§  測試線顯現(xiàn)，說明樣品為陽性。

§  測試線不顯現(xiàn)，說明樣品為陰性。

§  測試線的顏色變化與質控線的顏色變化一樣，都是由紅變紫。

§  檢測試紙條需保存于4度低溫條件，如在野外條件艱苦，盡量避免暴露在高溫下。

§  購買試紙

§  北京博歐實德生物技術有限公司
地址：北京朝陽區(qū)北苑路奧運媒體村天暢園1號樓C1-2006室[100107]

§   

§  http://www.instrument.com.cn/netshow/SH101701/office.asp

注：本片所述試紙僅能夠檢測含有Cry1Ab/1Ac轉基因成分的轉基因水稻，轉基因大豆種子檢測紙條須另外購買，詳情可咨詢北京博歐實德生物技術有限公司。
 

附：快速檢測試紙條法在大豆轉基因檢測中的應用

來源：上海農(nóng)業(yè)網(wǎng)

        轉基因食品的安全問題，特別是轉基因食品對人及動物的健康，以及對生態(tài)環(huán)境的影響，一直是人們關注的焦點。2008年中國從美洲進口3000多萬噸轉基因大豆，出口歐美等國家40多萬噸非轉基因大豆，2009年一季度我國大豆的進出口量呈遞增趨勢，為加強大豆產(chǎn)品的食品安全管理，需要檢驗機構對其進行有效監(jiān)控。

國內外轉基因檢測主要有三種方法，第一種是以核酸為基礎的PCR檢測方法，包括定性PCR、實時熒光定量PCR、PCR-ELISA半定量和基因芯片等方法；第二種是檢測外源基因的表達產(chǎn)物一蛋白質檢測方法，分為試紙條、ELISA和蛋白芯片三種方法；第三種是利用紅外檢測轉基因產(chǎn)品化學及空間結構。以核酸為基礎的PCR檢測方法，是目前國內外檢測生物技術產(chǎn)品最常用的方法，PCR方法具有準確、檢測限低、適用范圍廣的特點，但需要的儀器設備昂貴，檢測周期較長，因此需要一種快速檢測方法來充實，滿足大豆產(chǎn)品在種植、加工及貿(mào)易中的監(jiān)控需要。目前，快速檢測試紙條法能較好地對大豆產(chǎn)品進行檢測，且檢測結果準確、速度快、成本低，適合快速檢測的需要。

快速檢測試紙條法應用了雙抗體夾心法，首先將CP4 EPSPS蛋白特異的抗體，偶連于顯色試劑，并參入試紙條。當試紙條被插入含有CP4 EPSPS蛋白的植物組織的小量萃取物時，偶連抗體與蛋白之間就發(fā)生了結合，與偶連于顯色試劑上的某些但不是全部抗體形成夾心物。膜片含有兩個捕獲區(qū)，一個捕獲區(qū)可捕獲結合的CP4 EPSPS蛋白，另一個捕獲區(qū)可捕獲顯色試劑。當夾心物和未反應的顯色試劑被膜片上的特定區(qū)捕獲時，這些捕獲區(qū)就顯現(xiàn)出紅色。若膜片上僅存在一條紅色對照線，便說明受檢樣品為陰性樣品，若存在兩條線，便說明受檢樣品為陽性樣品。

文章采用快速檢測試紙條法與PCR方法，分別檢測陰性大豆、不同國家陽性大豆、不同轉基因含量的陽性大豆，比較兩種方法檢測結果的一致性，并對快速檢測試紙條檢測限進行評定，分析快速檢測試紙條在大豆轉基因檢測中應用的可能性。

1材料與方法1.1材料及試劑    東北大豆；美國進口大豆；巴西進口大豆；阿根

廷進口大豆；無水乙醇：分析純，市售；快速檢測試紙條：美國SDI公司；量筒：100 mL’分度值1mL;錐形瓶：250 mL;一次性樣品管：1.5 mL;一次性移液吸管：0.5 mL; GB/T19495.4- 2004《轉基因產(chǎn)品檢測核酸定性PCR檢測方法》中所用材料與試劑。

1.2儀器

天平：Mettler Toledo PB1502 - S/A，感量0.01 g，瑞士；實驗磨：備有篩孔孔徑為2.0mm的篩網(wǎng)，上海嘉定；PCR儀：PCR System 9700，美國；電泳儀：A- gageln mini，美國；凝膠成像儀：Uvitec，美國。

1.3測定方法

1.3.1 PCR法按GB/T19495.4 - 2004執(zhí)行。

1.3.2快速檢測試紙條法

(1)用實驗磨將樣品粉碎至90%以上通過2.0 mm篩網(wǎng)，稱取約30 9試樣于250mL錐形瓶中，加水100 mL，劇烈震蕩20s，靜置20 s。

(2)用一次性移液吸管吸取提取液0.5mL于一次性樣品管中。

(3)將一條轉基因快速檢測試紙條插入樣品管提取液中，靜置5 min。

(4)試紙條上結果窗上出現(xiàn)一條紅線證明為陰性大豆，出現(xiàn)兩條紅線為陽性大豆。

2結果與討論

2.1兩種方法測定陰性大豆的結果比較

用PGR法及快速檢測試紙條法對東北大豆進行轉基因測試，結果見表1。

結果表明，兩種方法對陰性大豆進行轉基因檢測，可以取得相同的結果。

2.2兩種方法測定陽性大豆的結果比較

用PCR法及快速檢測試紙條法對進口大豆進行轉基因測試，結果見表2~表4。

結果表明，兩種方法對美國、巴西、阿根廷大豆進行轉基因檢測，結果均為陽性，可以取得相同的結果。

2.3不同轉基因含量大豆的結果比較

將進口陽性大豆與國產(chǎn)陰性大豆按不同質量比進行混合，用快速檢測試紙條法測定轉基因含量，結果見表5。

結果表明，不同轉基因含量的陽性大豆，用快速檢測試紙條法進行檢測，可以取得陽性檢測結果，方法判定準確。

2.4檢測限的確定

取轉基因大豆與非轉基因大豆按質量百分比進行混合，確定其檢出限，結果表明快速檢測試紙條法檢出限可以達到0.1%。

3結論

采用快速檢測試紙條法測定大豆轉基因含量，測定時間僅需10 min，測定結果準確，與傳統(tǒng)PCR方法相比，縮短了工作時間，提高了工作效率，節(jié)約了檢測成本，檢測材料對環(huán)境沒有污染，可以推廣使用。

丁耀魁，沈娟，馬黎黎

（中國華糧物流集團北良有限公司，遼寧大連  116001）

糧油食品科技2010.2

江洪濤采集審核；程彬彬編輯上傳。

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